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色谱柱的活化步骤:
1. 在保持柱湿润的情况下,用(如或)洗涤柱子。例如,在开始使用柱子之前,要用3-5倍柱子体积的洗涤一下柱子。
2. 将纯水通过柱子流通20-30min。这一步可以去除残留的有机化合物和杂质。注意保持柱子湿润。
3. 通过柱子流通一定比例的与水混合物(例如:70%+30%水)。这样可以逐渐增加有机相的浓度,有助于保护柱子不被溶剂冲击。
4. 接着,可以使用一定比例的溶解样品,并以柱洗涤液的方式通过柱子。可以考虑用一些柱洗涤液去除样品残留。
5. 后,洗涤柱子以消除任何残留的溶液,或将柱子存放在一定的缓冲液/中,直到再次使用。
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液相色谱柱的五大填装方法
1.高压匀浆法装填
2.湿法装填
3.干法装填
4.等密度法装填
5.高粘度法装填
目前大多数实验室是购买商品预填装柱来满足分离、分析之需。液相色谱柱、特别是液相色谱柱的填装,需要有较高的技巧和熟练的技能。因此,有人甚至将“装柱”看作是“艺术加技术”。
但是只要掌握了一些基本的规律和方法,任何实验室都可以填装出具有较高柱性能的色谱柱。
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①高压操作的安全问题。常发生的问题是柱子与匀浆罐连接不牢,造成加压时柱头被高压冲下或柱子从匀浆罐上滑脱。此时,轻则填装失败,材料损失,重则造成人身伤害事故,一定要加以防范。除每次填装前均须仔细确认是否连接正确且牢靠外,还可加上由法兰盘和长螺杆组成的预防脱落装置,以防万一。
②通常,先填装的柱床较后填装的柱床紧密。因此,当使用时宜以相反的方向为宜,即让近匀浆罐一端作为使用时流动相的出口,而填装时的出口端则作为流动相的入口。
③新柱子使用前应以甲i醇冲洗20-30min, 后,再改用流动相平衡。
④新柱子宜选适宜的标准样品进行评价并记录,以备存查和比较。
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