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1 气相色谱气相色谱是一种以气体为流动相的柱色谱法,根据所用固定相状态的不同可分为气-固色谱(GSC)和气-液色谱(GLC)。2 气相色谱原理气相色谱的流动相为惰性气体,气-固色谱法中以表面积大且具有一定活性的吸附剂作为固定相。当多组分的混合样品进入色谱柱后,由于吸附剂对每个组分的吸附力不同,经过一定时间后,各组分在色谱柱中的运行速度也就不同。吸附力弱的组分容易被解吸下来,离开色谱柱进入检测器,而吸附力的组分不容易被解吸下来,因此后离开色谱柱。如此,各组分得以在色谱柱中彼此分离,顺序进入检测器中被检测、记录下来。
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柱填料的选择关系到色谱分离的可能性,而柱规格的选择直接影响分析速度、分离能力、检测能力及每次分析的溶剂消耗等。
柱规格包括两方面:柱内径和柱长度。柱内径,分析型一般为2~6 mm,制备型20 mm,大者可达80 mm;柱长度,分析型5~30 cm,制备型15~50 cm。
一般来说,柱内径不影响分离度与分析时间的关系。今天,柱技术已发展到不同柱内径的柱子能够具有相同的性能。不同内径的柱子又各具特点,对相同的分析时间和分离度来说,内径大的柱子比内径小的柱子多消耗溶剂。另一方面,较小内径的柱子对相同的检测信号来说所需样品量亦较少。
因此,在样品量有限i时,可使用小内径柱。柱长度增加虽可改善分离效果,但阻力也随之增加,必须提高入口压力。柱压是同时影响增加分离度和减少分析时间的主要障碍。分离度、分析时间及柱压三者相互制约,选择好其中两者,则第3个因素也就选好了。长柱可以给出高分离度,短柱可提供快速分离,我们可以根据样品情况去选用合适的色谱柱。
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液相色谱柱c18和c30柱子区别
C18和C30是两种不同类型的反相液相色谱柱,它们的区别在于碳链长度。
C18柱子的碳链长度为18,而C30柱子的碳链长度为30。因为C30的硅胶上含有更长碳链的链,所以相对于C18,它具有更高的静相润湿度和更大的相对表面积。
这意味着C30柱具有更高的保留能力和更好的分离效果,尤其是在脂质类化合物和脂肪酸的分离上表现更加突出。但是,C30柱也会更容易受到样品中杂质和氧化物的影响,因此在使用过程中需要注意保护和维护。
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在HPLC发展的早期,常采用“等密度法”来填装柱。多孔硅胶的骨架密度较高。例如,LiChrospher 100的表观密度约为2.3g/cm3,LiChrospher 500 为2.46g/cm3,LiChrospher 1000 为2.49g/cm3。不同牌号的硅胶因制法不同(例如,含有超细孔和封闭孔者表观密度小)而有差异,但多在2.2g/cm3以上。因此,需以高密度溶剂配制密度与硅胶骨架密度相近的混合液。常使用的高密度溶剂为碘代和代烷类(表12-2-3),再与适当比例的其他溶剂相配,配制出具有密度适宜的液体,使填料能呈“失重”状态悬浮于匀浆液中,以从容地用高压泵将其压入空色谱柱中,制出填装均匀的色谱柱。
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