细胞实验中的化学染色
1. 细胞实验中细胞经jia基绿一呱咯宁混合液处理后,其中的 DNA 和 RNA 出现不同的呈色反应,一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和jia基绿具有亲和力,且这两种染料的作用有选择性,jia基绿染高聚分子的 DNA 呈蓝绿色,呱咯宁染低聚分子的 RNA 呈红色。由此对细胞中的 DNA 和 RNA 进行定位、定性、和定量分析。病理染色-番红-固绿鼠膝关节番红-固绿染色番红-固绿染色法的染色原理在于嗜碱性的与碱性染料番红O结合呈现红色,嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成蓝色,与呈现红色的对比鲜明,从而将组织和骨组织区分开。
2. 由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目不同,在 pH 值不同的溶液中,蛋白质分子所带的净电荷多少不同。如在生理条件下,整个蛋白质所带负电荷多,则为酸性蛋白质;普鲁士蓝染色(Prussianbluereaction)又称为含铁血黄素染色,即经过亚铁qing化钾和稀酸处理后可以产生蓝色,常见于吞噬细胞内会间质内,主要显示三价铁盐。带正电荷多,则为碱性蛋白质。据此,可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后,用不同 pH 值的固绿染液分别染色,使细胞实验中细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。
3. 过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物,用联ben胺处理标本,细胞实验中细胞内的过氧化物酶能把联ben胺氧化为蓝色的联ben胺蓝,进而变为棕色产物,因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。
4. 组织、细胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用 PAS 法来显示,其化学基础是利用guo碘酸的氧化作用,打开碳链形成醛,生成的醛基与 Schiff 试剂中的无色品红反应形成紫红色化合物。
病理实验外包常见染色介绍Warthin-Starry银染:Warthin-Starry银染染色原理在于螺旋体表面的黏蛋白与银结合,呈黑色。
染色结果:菌丝及颗粒呈黑色,背景呈黄色。银染一种是检测聚酰胺凝胶中蛋白质的方法,其原理是银离子在碱性 pH 环境下被还原成金属银,沉淀在蛋白质的表面上显色。银染的方法种类很多,有文献报道的就有 100 多种。但是其准确的染色机制还不是特别地清楚。由于银染的灵敏度很高,可染出胶上低于 1ng 的蛋白质点,故广泛地用在 2D 凝胶分析上,及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测,如内源性GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究 。南京英瀚斯,的病理染色实验服务平台。因此组织切片经HE染色后,细胞核被素染成蓝紫色,细胞质、肌纤维、胶原纤维则呈现出不同程度的红色。
病理实验外包,病理染色组织样本保存液多聚甲醛的配置:4%多聚甲醛固定液(4% Paraformaldehyde Fix Solution, 4% PFA Fix Solution)是一种广泛用于组化
(Immunohistochemistry, IHC)、荧光(Immunofluorescence, IF)、细胞化学(Immunocytochemistry, IC)、流式分析(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)等检测时组织、组织切片、细胞等生物样品固定的溶液。织学上,4%的多聚甲醛穿透力强,固定均匀,能使组织硬化,有利于切片。该固定剂造成的组织收缩少,损伤小,较为温和,能很好的保存固有物质,保持组织的抗原性和细微结构。此外,多聚甲醛可用于固定并保存脂肪及脂类物质。南京英瀚斯,病理染色实验服务平台。病理染色-茜素红染色大鼠胸主动脉茜素红染色茜素红S是一种蒽醌类衍生物可与钙盐螯合形成橙红色复合物。
病理实验外包,病理染色组织处理的要求:恰当的组织处理是做好组化染色的先决条件,也是决定染色成败的内部因素,在组织细胞材料准备的过程中,不仅要求保持组织细胞形态完整,更要保持组织细胞的抗原 性不受损或弥漫,防止组织自溶。如果出现自溶坏死的组织,抗原已经丢失,即使用很灵敏的检测和高超的技术,也很难检出所需的抗原,反而往往由于组织的坏死或制片时的刀痕挤压,在上述区域易出现假阳性结果。根据团队发展需要,医学科研外包业务自2020年以“英瀚斯”品牌独立运营。
组织及时取材和固定
组织标本及时的取材和固定是做好组化染色的关键步,是有效防止组织自溶坏死,抗原 丢失的开始,离体组织应尽快的进行取材,好2h内,取材时所用的刀应锐利,要一刀下去切开组织,不可反复切拉组织,造成组织的挤压,组织块大小要适中,一般在2.5cm×2.5cm×0.2cm,切记取材时组织块宁可面积大,千万不能厚的原则,(也就是说组织块的面积可以大到3cm×5cm,但组织块的厚度千万不能超过0.2cm,否则将不利于组织的均匀固定)。固定液快速渗透到组织内部使组织蛋白能在一定时间内迅速凝固。从而完好的保存抗原和组织细胞形态。造模期间,配合使用饥饱失常法,即:~56天,饱食2天,禁食1天。